荧光PCR技术是一种基于聚合酶链反应(PCR)的方法,用于检测和定量DNA的存在它利用荧光探针与目标DNA序列结合,通过PCR扩增产生荧光信号基本过程包括:1.反应混合物中加入荧光探针、引物和DN。荧光pcr技术的基本原理和过程?更多详情请大家跟着小编一起来看看吧!

荧光pcr技术的基本原理和过程(1)

荧光pcr技术的基本原理和过程(1)

荧光PCR技术是一种基于聚合酶链反应(PCR)的方法,用于检测和定量DNA的存在。它利用荧光探针与目标DNA序列结合,通过PCR扩增产生荧光信号。基本过程包括:

1.反应混合物中加入荧光探针、引物和DNA模板;

2.进行PCR扩增,荧光探针与目标DNA序列结合;

3.在PCR过程中,荧光探针被酶切释放,产生荧光信号;

4.通过荧光检测仪测量荧光信号强度,定量目标DNA的存在。荧光PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点,广泛应用于基因表达分析、病原体检测等领域。

荧光pcr技术的基本原理和过程(2)

荧光pcr技术的基本原理和过程(2)

基本原理:

荧光PCR技术,是指在普通PCR技术的基础上,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

主要有两种方法及过程:

1、SYBR Green 染料法

SYBR能够结合到双链DNA上面,当系统中的模板被扩增时,SYBR能够有用结合到新组成的双链上面,跟着PCR的进行,结合的SYBR燃料越来越多,被仪器检测到的荧光信号越来越强,然后到达定量的意图。在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2、TaqMan探针法:

PCR扩增时在参加一对引物的一起参加一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两头分别标记一个陈述荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,陈述基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA恣意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使陈述荧光基团和淬灭荧光基团别离,然后荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,完成了荧光信号的累积与PCR产品形成彻底同步。