酵母双杂交技术原理：建立真核生物转录激活因子的框架利用GAL4捕获新蛋白质试验流程：构建诱饵质粒将待筛选蛋白的cDNA序列与转录激活域融合共转化细胞已分离的DNA结合域和转录激活域不会相互作用酵。酵母双杂交技术原理和步骤？更多详情请大家跟着小编一起来看看吧！
酵母双杂交技术原理和步骤(1)
酵母双杂交技术原理：
建立真核生物转录激活因子的框架
利用GAL4捕获新蛋白质
试验流程：
构建诱饵质粒
将待筛选蛋白的cDNA序列与转录激活域融合
共转化细胞
已分离的DNA结合域和转录激活域不会相互作用
酵母双杂交技术原理和步骤(2)
酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种常用的蛋白质相互作用研究方法，用于检测和分析蛋白质间的物理相互作用关系。其原理基于细菌酶活化剂Gal4的结构和功能。
以下是酵母双杂交技术的基本原理和步骤：
原理：
酵母细胞中的转录因子Gal4由两个部分组成：DNA结合域（DNA-binding domain, DBD）和激活域（activation domain, AD）。
用于检测蛋白质相互作用的目标蛋白（prey）与AD结合时，可激活报告基因的表达。
目标蛋白的相互作用伙伴（bait）与DBD结合时，带着AD一起靠近报告基因。
步骤：
(注意：以下步骤仅为简要介绍，具体实验步骤可能会根据实验需求有所不同)
a. 预处理：
选择一个包含Gal4 DNA结合域的酵母突变株作为宿主酵母菌。
构建两个质粒：一个质粒编码目标蛋白的DBD结合域（bait），另一个编码潜在互作蛋白的AD结合域（prey）。
将这两个质粒导入宿主酵母菌中。
b. 杂交实验：
在选择适当的培养基上进行酵母双杂交实验，带有特定筛选条件。
将转录报告基因（如LacZ、His3、或Ade2）的启动子与真核生物的基因启动子连接起来。
目标蛋白的DBD结合域与AD结合域一起通过形成蛋白复合物，相互接近转录报告基因，激活其表达。
根据报告基因的表达情况，判断目标蛋白与互作蛋白之间的相互作用关系。
c. 结果分析：
通过观察菌落形态、转色底物等方法对酵母菌进行初步筛选。
对筛选出的阳性克隆进行进一步验证，如荧光染色、Western blot、共沉淀等。
最终确认目标蛋白之间是否存在物理相互作用。
酵母双杂交技术原理和步骤(3)
酵母双杂交系统技术步骤
1.
将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒;
2.
将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中,选择被转化的酵母;
3.
再将文库质粒转化到酵母中;
